Los autores declaran que no existen conflictos de intereses en la realización, ni la comunicación del presente trabajo.
El Centro Especializado de Diagnóstico y Terapia, del Centro de Investigaciones Médico Quirúrgicas, produce [18F]FDG para su uso en la obtención de imágenes mediante Tomografía por Emisión de Positrones en Cuba. El objetivo del trabajo fue definir la estabilidad del producto en diferentes intervalos de tiempo en condiciones ambientales. Se evaluaron los parámetros físico-químicos y microbiológicos establecidos por la especificación de calidad: pH, identidad y pureza radionuclídica, pureza química, solventes residuales, endotoxinas y esterilidad. Los resultados mostraron que la [18F]FDG cubana fue estable durante 12 horas de almacenamiento después de la dispensación del producto en condiciones de temperatura entre 22-25°C.
The Specialized Center for Diagnosis and Therapy of the Center for Medical Surgical Research, produce [18F]FDG for using in medical imaging technology of Positron Emission Tomography in Cuba. The aim of this work was to evaluate the stability of the product at different time intervals under environmental conditions. [18F]FDG pH, radionuclidic identity and purity, chemical purity, residual solvents, bacterial endotoxins and sterility were evaluated. The results showed that Cuban [18F]FDG was stable in stored conditions, during twelve hours after delivering, between 22 and 25°C of temperature.
En el Centro Especializado de Diagnóstico y Terapia (CEDT-CIMEQ) se produce mediante síntesis química la molécula de 2-[18F]Fluoro-2-desoxi-D-glucosa ([18F]Fludesoxiglucosa o [18F]FDG). Este radiofármaco se emplea, en la propia instalación, para la obtención de imágenes por Tomografía por Emisión de Positrones (PET, por sus siglas en inglés), en el diagnóstico de diferentes enfermedades, en las que se destacan las de origen oncológico.
Para el permiso de uso clínico se cuenta con el autorizo del Centro para el Control Estatal de Medicamentos, Equipos y Dispositivos Médicos (CECMED). Cada lote se transporta con su certificado de calidad, como garantía de que el producto cumple con las especificaciones establecidas en la farmacopea vigente [
Para la comercialización interhospitalaria es necesario definir las condiciones de almacenamiento, transportación y validez del producto, según las propias normativas del CECMED [
El trabajo consistió en estudiar la estabilidad, en condiciones ambientales, de tres lotes de producción consecutivos de [18F]FDG, a través de la evaluación de los indicadores de calidad establecidos para el producto.
En el Departamento de Producción de Radiofármacos se desarrolla la producción de [18F ]fludesoxiglucosa, mediante síntesis química por sustitución bimolecular. Una vez concluida, una muestra del radiofármaco pasa al laboratorio de control de la calidad donde se realizan los ensayos establecidos. El estudio de estabilidad se realizó a tres lotes consecutivos de producción: A, B y C. Las muestras se presentaron en bulbos de geometría 10 R, etiquetados con la información específica de cada uno de ellos. El estudio se desarrolló durante los tiempos 0; 3; 6; 8; 10 y 12 horas. El tiempo cero corresponde al momento de la dispensación de la muestra inicial y los restantes tiempos coinciden con el tiempo de almacenamiento de las muestras a partir de la dispensación referida. Las seis muestras de cada lote se almacenaron a temperatura ambiente en contenedores plomados, como los que se usarán en la distribución del radiofármaco. La temperatura de almacenamiento se controló con el termohigrómetro calibrado Opus 20.
A todas las muestras se le realizaron los ensayos físico-químicos que garantizan la calidad del producto según lo descrito en la farmacopea americana (USP 40) [
Las determinaciones del tiempo de vida media se realizaron en calibrador de dosis, con sus controles diarios ejecutados y con la calibración vigente.
Las mediciones potenciométricas se realizaron posterior a la calibración previa con las soluciones tampones correspondientes, según el intervalo de pH definido en la farmacopea [
Para la determinación de la pureza radionuclídica se utilizó el espectrómetro gamma con detector de germanio hiperpuro y analizador multicanal (HPGe). En el ensayo se reportó el porcentaje de la actividad de los picos alrededor de los 511 y 1 022 keV, asociados a la aniquilación de la desintegración β+ del 18F y a la suma de dos fotones detectados, con respecto a la actividad del espectro total de la muestra.
La determinación de la concentración de los solventes residuales de etanol y acetonitrilo, se realizó mediante cromatografía gaseosa. La concentración se determinó semicuantitativamente al comparar los picos correspondientes de etanol y acetonitrilo, con un patrón que contiene las concentraciones límites permisibles de estos solventes, para el etanol 5 mg/mL y para el acetonitrilo 0,41 mg/mL. [
La pureza radioquímica de [18F]FDG se identificó utilizando la técnica de cromatografía de placa delgada. Se usaron láminas de sílica gel sobre soporte de aluminio. La detección de las impurezas se realizó en el escáner TLC (β+). Se utilizó un software específico para la cuantificación de la pureza del producto terminado [18F]FDG y sus impurezas.
La determinación semicuantitativa de la concentración de kryptofix se realizó mediante la comparación de la coloración del revelado, en cámara de iodo, de la mancha de la muestra con la mancha del patrón, que corresponde a una concentración de 50 µg/mL. [
Las determinaciones de la concentración de endotoxinas se realizaron en un espectrofotómetro. En la técnica se determinó la absorbancia de un cromóforo liberado en la cascada de reacciones causada por la interacción de endotoxinas bacterianas con el reactivo LAL, que contiene amebocitos (leucocitos) del cangrejo herradura (Limulus polyphemus o Tachypleus tridentatus). Para la cuantificación de la concentración de endotoxinas se utilizó el software Spectro Star Nano.
La esterilidad del radiofármaco se realizó mediante inoculación directa en los medios de cultivo caldo tioglicolato y triptona soya. Las muestras se mantuvieron en incubación a temperaturas de 30-35°C y 20-25°C respectivamente durante 14 días.
Los resultados se procesaron con el paquete estadístico STATGRAPHICS Centurion XV.II
La temperatura en las condiciones de almacenamiento osciló entre 22 y 25°C, durante el desarrollo de los ensayos.
La apariencia de cada una de las muestras en los lotes estudiados y en los diferentes momentos cumple con la especificación de calidad, todas fueron muestras transparentes e incoloras.
En todos los casos la detección visual de la tonalidad de la muestra estuvo por debajo de la coloración de la mancha correspondiente al patrón de 50 µg/mL. Los resultados del comportamiento de la concentración de kryptofix en el tiempo 0 y 12 horas después de la dispensación en los tres lotes se presentan en la
Como puede observarse en la
Desv. est.- Desviación estándar y C.V.-coeficiente de variación
Lotes
A
B
C
Promedio pH
6,38
6,45
6,24
Desv. est.
0,19
0,39
0,29
C.V. (%)
2,99
6,00
4,62
En la
Fuente
Suma de Cuadrados
Gl
Cuadrado Medio
Razón-F
Valor-P
Entre grupos
0,133
2
0,066
0,74
0,49
Intra grupos
1,348
15
0,090
Total
1,480
17
El comportamiento de la pureza radioquímica en los lotes A, B y C, durante el desarrollo del estudio de estabilidad se presenta en la
Desv. est.- Desviación estándar y C.V.-coeficiente de variación
Lotes
A
B
C>
Promedio (%)
95,52
96,94
97,19
Desv. Est. (%)
2,69
1,90
0,43
C.V. (%)
2,82
1,96
0,44
Este indicador mostró igual comportamiento en el tiempo en cada uno de los lotes estudiados. En las pruebas de múltiples rangos, mediante el procedimiento de diferencia mínima significativa de Fisher, se encontró que no hay diferencias estadísticamente significativas entre cualquier par de medias, con un nivel del 95% de confianza.
El comportamiento del tiempo de vida media en las muestras se presenta en la
Recuento
Promedio (min.)
Desviación estándar (min.)
Coeficiente de variación (%)
Tiempo de vida media lote A
6
110,55
1,26
1,14
Tiempo de vida media lote B
6
107,92
3,16
2,93
Tiempo de vida media lote C
6
110,12
3,07
2,79
Total
18
109,53
2,75
2,51
En el estudio estadístico del comportamiento del tiempo de vida media en un lote y la interacción entre los tres lotes del estudio, se encontró que no hay diferencia estadísticamente significativa entre las medias de las variables con un nivel del 95% de confianza, según el ANOVA de los datos y las pruebas de múltiples rangos. Estos resultados se corroboran con con los obtenidos en el HPGe, donde en todos los casos el 100% de la actividad corresponde con la energía de emisión y aniquilación positrónica.
En la determinación de los solventes residuales en los tres lotes del producto terminado de [18F]FDG la concentración de etanol en los diferentes tiempos fue inferior al límite establecido para este solvente de 5 mg/mL [
Lote evaluado
0 horas
3 horas
10 horas
12 horas
A
1,74
2,15
1,91
1,74
B
1,88
2,37
2,01
1,88
C
2,22
2,31
1,24
1,17
Los lotes A, B y C, cumplieron los indicadores de calidad del producto exigidos en la farmacopea USP 40 [
Los valores de pH se encontraron en el rango de 4.5 - 7.5 y se cumplió con la especificad de este parámetro [
Por otra parte, al demostrar que la pureza radioquímica cumple con la especificación de calidad en el período de estudio, sirve además como indicador de la efectividad con que se logró la sustitución nucleofílica durante el proceso de síntesis. Esto indica que el porcentaje de marcaje de la molécula de FDG durante este proceso, es muy superior a las posibles impurezas acetiladas y fluoradas que se pueden obtener en el mismo.
El tiempo de vida media es un parámetro muy importante en la determinación de la calidad del producto final. Este ofrece la seguridad de que la radioactividad de la muestra, corresponda al isótopo positrónico Flúor -18, con el objetivo de garantizar un certero diagnóstico en los pacientes a través del PET. Todas las muestras cumplieron este indicador, los valores se encuentran entre 105 y 115 minutos, especificación que corresponde al Flúor-18 [
Los resultados obtenidos durante el estudio de la molécula de [18F]FDG cubana son comparables con estudios similares. Ferreira y colaboradores reportan como tiempo de validez de [18F]FDG, 10 horas después de producida la molécula [
La molécula de [18F]fludesoxiglucosa cubana es estable durante 12 horas en condiciones de almacenamiento entre 22 y 25°C.